สไลด์นับเซลล์ Cell Counting Chamber Hemocytometer อุปกรณ์ห้องทดลอง
Cell Counting Chamber (Hemocytometer) สไลด์นับเซลล์
เป็นอุปกรณ์ที่ใช้นับจำนวนเซลล์(ยีสต์) โดยที่สามารถนับได้ในปริมาตรที่คงที่ ใช้ร่วมกับกล้องจุลทรรศน์
ในการทำงานด้าน Cell culture การนับเซลล์เป็นขั้นตอนที่สำคัญในการทำงาน โดยผู้วิจัยจะต้องทำการนับเซลล์ให้ได้ความเข้มข้นของเซลล์ที่ถูกต้อง แม่นยำ เพื่อนำไปทำการทดลองต่อ การนับเซลล์โดยใช้สไลด์ Hemocytometer (ภาพที่ 1) เป็นเทคนิคที่มักถูกนำมาใช้ในการนับปริมาณเซลล์ โดย Hemocytometer เป็นสไลด์นับเซลล์ที่ใช้ในการนับจำนวนเซลล์ในตัวอย่างของเหลว โดยภายในสไลด์จะมีลักษณะสี่เหลี่ยมขนาดเล็กๆ เพื่อช่วยในการหาตำแหน่งของเซลล์ที่ต้องการนับ
วิธีการนับเซลล์โดยใช้ Hemocytometer มีขั้นตอนดังนี้
เตรียมตัวอย่าง
เตรียมตัวอย่างที่ต้องการนับ เช่น เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการ เซลล์เม็ดเลือด หรือแบคทีเรีย เป็นต้น ซึ่งจะต้องมีการย้อมสีด้วย Trypan blue เพื่อแบ่งจำแนกเซลล์ที่มีชีวิตและเซลล์ที่ตาย โดยทำการผสมเซลล์และสี Trypan blue โดยทั่วไปจะใช้อัตราส่วน 1:1
โหลดตัวอย่างใส่ใน Hemocytometer
วางแผ่น cover slip ลงบนสไลด์แล้วใช้ปิเปตโหลดตัวอย่างที่ขอบของ cover slip เติมตัวอย่างในช่องของ Hemocytometer ให้เต็มทั้งหมด และควรให้ตัวอย่างกระจายอย่างทั่วถึงในช่องเพื่อให้การนับเป็นไปได้ที่แม่นยำ
การนับเซลล์
ในการหาปริมาณเซลล์ที่ยังมีชีวิตอยู่ จะทำการนับจำนวนเซลล์ที่ย้อมไม่ติดสีของ Trypan blue ซึ่งการนับจำนวนเซลล์ ให้นับเซลล์ที่อยู่ใน 4 ช่องใหญ่ด้านนอก (รูปภาพที่2 – ตารางสีแดง) กรณีที่มีเซลล์อยู่บนเส้นขอบช่องใหญ่แบ่ง ให้นับเฉพาะเซลล์ที่อยู่บนเส้นขอบด้านบนหรือด้านล่าง และขอบด้านซ้าย หรือด้านขวาเท่านั้น
การคำนวณผลลัพธ์
หลังจากนับเซลล์เรียบร้อยแล้วให้คำนวณหาปริมาณเซลล์ในตัวอย่าง โดยใช้สูตร
Total cells/ml = (Total cells counted x Dilution factor x 10000 cells/ml)/ Number of squares counted
แต่อย่างไรก็ตามในการใช้งาน Hemocytometer ยังมีข้อควรระวังเมื่อสไลด์ที่นำมาใช้หลังจากการล้างจะต้องแห้งและสะอาด เนื่องจากหากมีน้ำจากการล้างปนเปื้อนในสไลด์ อาจทำให้ปริมาตรของเซลล์ที่นำมาโหลดใส่มีความคลาดเคลื่อน ส่งผลให้ได้ความเข้มข้นของเซลล์ไม่แม่นยำ ดังนั้นแล้วในการนับเซลล์เพื่อหาปริมาณเซลล์ สามารถเลือกใช้สไลด์แบบไม่ใช้ซ้ำ
***สินค้าซื้อแล้วไม่รับเปลี่ยนหรือคืนทุกกรณี ยกเว้นความเสียหายจาก การขนส่ง หรือ การผลิต***
(5)
(4.2)